DNA采血卡與口腔細(xì)胞卡

本文介紹一種用DNA采血卡技術(shù)從口腔細(xì)胞和全血中提取DNA的方法，采用甲醇固定和洗脫P(yáng)CR程序。根據(jù)基于PCR的基因分型，提取的DNA在質(zhì)量上與已發(fā)表的WhatmanFTA協(xié)議相當(dāng).從干燥樣品中洗脫DNA是已發(fā)表的Whatman FTA協(xié)議中已知的限速步驟，該方法允許在幾個(gè)PCR反應(yīng)中使用樣品的每個(gè)3毫米穿孔，而不是標(biāo)準(zhǔn)的每個(gè)樣品穿孔一次PCR反應(yīng)。因此，這一優(yōu)化方案擴(kuò)大了每個(gè)收集的口腔拭子樣本的用途和成本效益，用于核酸PCR和基因分型。

惠特曼、FTA、DNA采血卡與無菌泡沫噴頭結(jié)合，用于無痛收集松散的內(nèi)頰(頰)細(xì)胞，包括那些漂浮在唾液中的細(xì)胞。DNA采血卡技術(shù)可防止基因組DNA在室溫下降解，長期存檔后可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。為了進(jìn)行分析，從干樣品區(qū)打出一個(gè)小圓盤。

Watman標(biāo)準(zhǔn)協(xié)議要求光盤在FTA凈化試劑(CAT)中清洗，干燥，和整個(gè)樣品盤，然后直接納入PCR擴(kuò)增反應(yīng)。這些協(xié)議不調(diào)整反應(yīng)體積或PCR條件以適應(yīng)光盤的存在

研究發(fā)現(xiàn)，唾液樣本的使用是血液樣本的一種很好的替代方法。獲得高質(zhì)量的基因組DNA，它們的使用大大提高了流行病學(xué)研究中的應(yīng)答率。理論上講，口腔細(xì)胞比血液每體積產(chǎn)生更多的DNA產(chǎn)物。隨著穩(wěn)定性的提高和收集過程中不感到不適，它們正在成為選擇的樣本，允許在任何現(xiàn)場(chǎng)情況下容易收集。然而，耗時(shí)的樣本穿孔過程是一個(gè)已知的限速步驟，如果一個(gè)特定的分析需要多個(gè)樣本準(zhǔn)備。這方面的另一個(gè)問題是生物樣品的消耗相對(duì)較快。DNA提取過程中的甲醇固定曾經(jīng)用于保存在Guthrie卡上的血樣。值得注意的是，不同的固定技術(shù)對(duì)染色質(zhì)超微結(jié)構(gòu)和dna提取的影響表明，使用甲醇固定劑.

我們首次用改進(jìn)的甲醇固定法從Whatman FTA經(jīng)典卡片上收集到的口腔細(xì)胞中進(jìn)行DNA洗脫。這樣可以縮短樣品處理時(shí)間，增加每次打孔的PCR反應(yīng)次數(shù)。

經(jīng)修訂后的方法與標(biāo)準(zhǔn)的Whatman FTA協(xié)議進(jìn)行了比較，該協(xié)議既適用于Whatman FTA經(jīng)典卡上的頰細(xì)胞(存儲(chǔ)0至1年)，也用于1 mm Whatman bfc 180濾紙采血卡上的血斑(存儲(chǔ)2至5年)。