采血卡干血斑：生物轉(zhuǎn)化的新應(yīng)用？

組織樣本的生物包裝是一個(gè)昂貴的過程，需要處理、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)幕A(chǔ)設(shè)施。一種具有50多年歷史的血液采集方法可能具有生物基底技術(shù)的應(yīng)用，可以在不影響質(zhì)量或DNA產(chǎn)量的情況下使這一過程更加有效。自20世紀(jì)60年代以來，采血卡干血斑(DBS)一直被用于新生兒腳跟點(diǎn)刺試驗(yàn)，以鑒別患有苯丙酮尿癥的新生兒。DBS還被廣泛用于收集和儲(chǔ)存樣品，用于藥物監(jiān)測、遺傳分析和分子流行病學(xué)研究，而運(yùn)輸和儲(chǔ)存選擇很少。Choi等人提出采用適當(dāng)?shù)奶崛》椒?，可以在不影響DNA產(chǎn)量和應(yīng)用的情況下，利用DBS存儲(chǔ)血樣。

研究人員收集了edta處理的全血樣本以及DBS，在室溫下干燥24小時(shí)，從20至40歲的成年人中提取。他們將樣本分成兩組，一組在室溫下儲(chǔ)存，另一組在-80℃下保存。然后，他們又將樣品再分成兩周、四周或三個(gè)月保存。

當(dāng)樣品的儲(chǔ)存時(shí)間結(jié)束時(shí)，研究小組從星展中提取單鏈dna(Ssdna)，首先將卡片切成小塊，然后在室溫下用500μL的蒸餾水將它們轉(zhuǎn)移到1.5mL微生物中，持續(xù)5分鐘。他們丟棄水，重復(fù)兩次，然后將紙張浸泡在500μL的磷酸鹽緩沖液或10 mm的Tris-EDTA中。他們把紅細(xì)胞溶解在100μL將紅細(xì)胞裂解緩沖液用10μL蛋白酶K在37℃下孵育一夜，然后用干凈的吸管尖將濾紙壓在試管底部，然后在95℃下進(jìn)一步孵育15分鐘，然后離心。他們將上清液保存在-80℃直到分析。

他們進(jìn)行雙鏈dna(Dsdna)提取，將切掉的DBS濾紙浸泡在40μL的磷酸鹽緩沖液或Tris-edta中，并在37℃下孵育一夜。然后，他們使用DNease血液和組織試劑盒提取DNA。

他們用質(zhì)量分光度法對(duì)DNA產(chǎn)量進(jìn)行了分析，并測定了GAPDH和β-actin轉(zhuǎn)錄本，以驗(yàn)證提取的DNA的質(zhì)量。室溫保存在濾紙上的全血中dsDNA的產(chǎn)率約比布菲皮的產(chǎn)率高11%。在濾紙上采集的樣品中DNA的穩(wěn)定性高于冷凍液樣品。通過對(duì)以同樣方式保存的樣本進(jìn)行比較，他們發(fā)現(xiàn)冷凍全血的產(chǎn)率(39%)高于布菲毛皮(39%)。然而，這只比室溫儲(chǔ)存的DBS樣品的收率高出11%?？偟膩碚f，室溫下的DBS DNA純度低于冷凍樣品。

兩周后提取的ssDNA量比全血樣品高約65%，4周后約高44%。此外，從布菲皮毛樣品中提取的sDNA純度高于全血樣品。在冷凍條件下貯藏時(shí)，產(chǎn)量僅受貯藏時(shí)間的影響。Tris-EDTA緩沖液也能產(chǎn)生較好的sDNA產(chǎn)率。同樣，對(duì)GAPDH和β-actin轉(zhuǎn)錄本的測定表明，DBS在室溫下可以產(chǎn)生適合于PCR分析的產(chǎn)物。